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MEC-1/OVA and B16F10/OVA target cells were lentivirally transduced to stably express the calcium sensor GCaMP6s29. Cells were selected for stable expression using blasticidin (10 µg/ml: Life Technologies, R210-01) and FACS-sorted for GCaMP6s posit...

这段文本描述了实验中使用的细胞系及相关操作。具体而言,MEC-1/OVA和B16F10/OVA靶细胞被用来稳定表达钙传感器GCaMP6s29,通过lentiviral转导进行基因转染。为了选择稳定表达的细胞,使用了blasticidin (10 µg/ml)进行筛选,并通过流式细胞术(FACS)对GCaMP6s阳性细胞进行分选。pCDH-NLS-copGFP-EF1-BlastiS是一个含有NLS-GFP报告基因的载体,在Jan Lammerding的贡献下获得(Addgene plasmid #132772)。Histone-2B-mCherry表达的B16F10/OVA细胞经过lentiviral转导,表达NLS-GFP并使用blasticidin (10 µg/ml)进行选择,并通过流式细胞术对双阳性GFP和mCherry表达的细胞进行分选。Apple-53BP1trunc64是Ralph Weissleder提供的礼物(Addgene plasmid #69531),用于稳定地表达Apple-53BP1trunc在B16F10/OVA细胞中。通过puromycin (2 µg/ml)筛选稳定积分构建物,并通过流式细胞术对Apple阳性细胞进行分选。已经对分选后的细胞进行亚克隆,并将三个亚克隆池化以实现均一的报告基因表达水平。


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